비냉동 용액에서 적혈구의 장기간 저장

(19) 대한민국특허청(KR)
(12) 공개특허공보(A)
(51)Int. Cl.6
A01N 1/02
A61K 35/24
(11) 공개번호 특1998-703265
(43) 공개일자 1998년10월15일
(21) 출원번호 특1997-706669
(22) 출원일자 1997년09월24일
번역문제출일자 1997년09월24일
(86) 국제출원번호 PCT/US 96/003994 (87) 국제공개번호 WO 96/029863
(86) 국제출원출원일자 1996년03월22일 (87) 국제공개일자 1996년10월03일
(81) 지정국 EP 유럽특허 : 오스트리아 벨기에 스위스 리히텐슈타인 독일 덴마크
스페인 핀랜드 프랑스 영국 그리스 아일랜드 이탈리아 룩셈부르크
모나코 네덜란드 포르투칼 스웨덴
국내특허 : 오스트레일리아 캐나다 중국 일본 대한민국 싱가포르
(30) 우선권주장 8/409,599 1995년03월22일 미국(US)
(71) 출원인 오간, 인코포레이티드 골드만 로버트 엠.
미국 일리노이 60614-2013 시카고 웨스트 몬타나 스트리트 1510
(72) 발명자 메리만 하롤드 티.
미국 매리랜드 20861 애스턴 터커 래인 1600
(74) 대리인 박장원
심사청구 : 없음
(54) 비냉동 용액에서 적혈구의 장기간 저장
요약
본 발명은 냉동 상태하에서 적혈구의 저장 보존기간을 연장하는 방법에 관한 것으로서, 잔류 플라스마가
보지하고 70 mOsm 보다 낮은 유효한 오스몰농도를 가진 생물학적으로 적합한 용액을 가할때에 적혈구로부
터 분리된 플라스마를 포함한다. 이 생물학적으로 적합한 용액은 물 보다 더 느리게 적혈구에 침투되며
비침투성 음이온과 비침투성 비전해액이 아닌 최소한 하나의 침투되는 용질을 포함하는 것이 바람직하다.
명세서
[본 발명의 배경]
본 발명은 적혈구를 장기간 동안 냉동된 상태에서 저장하는 방법에 관한 것이다.
냉동에 의해 저장된 적혈구들은 이들이 저장되는 용액에 따라 제한된 보존기간 (shelf-life)을 가진다.
최소한 미국에서의 보존기간이라 함은 수혈 후 24시간 용기에서 순환되는 세포들의 비율 측정에 의해 결
정된다. FDA 에서는 공식적인 것은 아니지만 허가된 제품에 대해 최저 75%로 규정하고 있다. 또한, 수혈
되는 자유 헤모글로빈의 양은 보존기간을 제한할 수 있다. 아직 공식적으로 최대값을 정하지 않았으나,
일반적인 규약으로 용혈현상이 1%를 초과되지 않도록 하고 있다.
인간의 적혈구의 냉동 저장에 대한 일반적인 두가지 방법으로는 (1) 원래의 항응고 용액에서 냉동상태에
서 저장하는 방법과, (2) 원래의 항응고 용액으로부터 적혈구의 분리 후의 저장방법과 적혈구 저장을 위
해 특수하게 만든 용액에서 세포들을 재현탁하는 것이다. 이들 두가지 방법을 이용할때에는 최소한 잔류
플라스마의 양이 적혈구 용액에 남아 있다.
원래의 항응고제에서 저장하기 위해, 전체 혈액은 재래의 방식으로 시트레이트, 포스페이트, 덱스트로스
(디-글루코스) 및 아데닌 (CPDA-1)을 함유하고 있는 용액에서 뽑아낸다. 이 혈액은 약 1500×G (soft
spin)에서 원심분리하고 플라스마는 약 75%의 헤마토크리트로 적혈구의 현탁물을 버리며, 제거한다. 혈소
판은 두번째 혈침에 의해 플라스마로 부터 제거할 수 있다. CPDA-1에 수집된 셀들은 추가로 처리를 하지
않고 또는 플라스마로 제거하거나 제거하지 않고 약 5주 동안 저장할 수 있다.
보존된 용액에서의 저장과 적혈구의 재현탁을 위해, 혈액은 재래의 방법으로 오로지 시트래이트, 포스페
이트와 글루코스를 함유하고 있는 용액속으로 빼낸다. 이 혈액은 위에 기술한 바와 같은 속도로 원심분리
를 하나 적혈구는 약 100ml의 첨가 용액에 재현탁되는데 약 55%의 헤마토크리트에서 적혈구 현탁물로 나
타난다. 최근 미국에서 허용된 첨가용액은 표 1에 기술된 바와 같이 Adsol과 Nutricel이다. Sagman으로
알려진 다른 첨가용액은 미국에서 아직 허가를 받지 못하였다. 이러한 첨가용액으로 저장된 셀들은 6주간
의 보존기간을 가진다.
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[표 1]
CPDA-1과 Adsol은 Baxter Travenol에서 판매를 하며, Nutricel은 Cutter에서 판매를 한다. 오스몰농도는
비침투성 성분에 의해 제공되는 유효한 오스몰농도이다.
저장하는 동안, 인간의 적혈구는 아데노신 트리포스페이트(ATP)와 2, 3-디포스포글리세래이트(2, 3-
DPG)의 세포 레벨에서의 감소, 세포 모르폴로지에서의 변화와 진전되는 용혈현상의 변화를 포함하여 형태
학적 및 생화학적 변화를 받는다. 단순히 초기 상승 후, ATP의 농도는 6주간의 저장 후 점진적으로 이의
초기 수준의 30%와 40%로 감소된다. 비장과 간에 좁은 채널을 통하여 적혈구 통과에 기본이 되는 적혈구
의 세포막의 유동성은 ATP 수준을 느즌하게 상호 관련하게 된다.
순환에 있어서 적혈구의 근본적인 역할은 조직에 산소를 운반하는 것이다. 헤모글로빈의 유일한 특징은
조직에 산소의 부분압이 상대적으로 높다 하여도 상당량의 산소가 빠질 수 있다. 2, 3-디포스포글리세래
이트 (2, 3-DPG)로 불리는 화합물은 이 프로세스에서 기본이며, 이것이 없으면 산소는 효과적으로 조직에
전달될 수 없다. 최근 실험에서와 같이 냉동하여 저장하는 동안, 2, 3-DPG의 수준은 약 3일 또는 4일 저
장 후 급속히 떨어지며 약 10일에서는 제로(0)에 접근한다.
형태학적 변화는 적혈구 (유극 적혈구)상에 침상체의 전개를 유도하면서 저장중에 일어난다. 이러한 침상
체들은 이 적혈구의 포면 대부피의 비와 좁은 채널을 통과하는 이들의 능력변형을 급변히 변화시켜 소낭
처럼 자라게 된다. 그러한 셀들은 비장과 간에 이어서 수혈에 의해 혈액순환으로 여과될 것이다. 위에 언
급한 바와 같이, 수혈되는 적혈구의 적어도 75%의 수혈을 받아들이기 위해 24시간 동안 순환에 남아 있으
야 한다. ATP 농도와 적혈구의 모르폴로지는 수혈을 위해 저장된 셀의 안정화 지시제로 제공된다.
수혈가능한 적혈구의 보존기간을 연장하기 위해, 셀을 저장하거나 또는 ATP와 가능하면 2,3-DPG에 급속한
저하를 막아주는 어떠한 방법으로 그들을 처리하여 줄 필요가 있다. 적혈구의 보존기간을 연장하는 용액
들은 공지의 용액이다(참조:Meryman, 미국특허 제4, 585, 735호 및 Meryman 미국특허 제5,250,303호, 이
들 두가지 문헌에 완전히 밝히고 있음). 전형적으로 시트래이트, 포스페이트, 글루코스 및 아데닌과 셀에
서 ATP 수준의 지속에 의해 보존기간을 연장시키는 기능의 다른 성분을 포함한다. 121mOsm로 낮은 유효한
오스몰농도를 가지는 한 첨가용액이 알려지고 있다. 그러나, 보다 낮은 오스몰농도를 가진 용액은 사용되
지 않는다. 부가적으로 말하자면, 세포내에서 측정한 pH(이하 pHi )가 4℃에서 약 7.4이면, 해당작용
(glycolytic activity)이 적혈구에서 향상된다.
이 현탁된 용액의 유효한 오스몰농도는 확장된 세포저장시간에 있어서 또다른 주요 인자이다. 유효한 저
삼투압은 실제적으로 저장되는 동안 용혈현상을 감소시키고 적혈구 모르폴로지가 증가하는 것을 보여 준
다. 이 메카니즘을 아직 증명할 수 없으나, 아마도 삼투압성 팽윤이 셀 표면장력을 증가시킬 것이며 그
때문에 용이한 모양이 일반적으로 저장된 적혈구와 결합하여 변화한다.
적혈구를 세척하면, 셀의 평윤으로부터 용혈현상이 짧아 최대의 저삼투압으로 이루어진다. 그러나, 적혈
구 유니트의 세척은 고가이며 얻어진 보존기간에 의해 쉽사리 판정할 수 없다. 사용상 보편적 표준 처리
방법은 플라스마 제거에 이어 초기 혈침과 100ml의 첨가 용액을 약 200ml의 적혈구와 50ml의 잔류 플라스
마에 첨가하는 것을 포함한다.
첨가용액의 저삼투압은 이 용액을 첨가하는 동안 용혈현상의 위험으로 인해 제한된다. 이론적으로는 비록
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첨가용액에 대해 충분히 용질이 삼투압적으로 간균세포를 지지할 필요가 없는데, 이는 플라스마가 혼합이
일어나기 전, 몇몇 적혈구가 첨가용액과 접촉 할 것이며 용액의 첨가시간에 추가적으로 삼투압적인 공급
을 제공하기 때문이다. 만약, 첨가용액이 너무 저삼투압적이면, 이러한 적혈구들은 트질(용혈시키다) 것
이다. 그 결과, 너무나 저삼투압적인 용액들을 사용할 수 없다. 따라서, 셀과 잔류 플라스마를 혼합한
후, 용액의 최종 오스몰농도는 현저히 저삼투압적이 아니며 저삼투압의 장점으로도 부적절하다.
정상적으로 두 개의 오목한 디스크를 가진 적혈구는 이들이 용혈되기 전에 약 170 mOsm의 외적 오스몰농
도에서 그들의 정상적인 부피에 약 2배에 가깝게 팽윤할 수 있다. 그러나, 다분자 안정제라고 부르는 호
프마이스터 시리즈(Hofmeister series)의 왼쪽 끝으로 부터의 용질이 셀의 안쪽과 바깥쪽에 존재하면 막
팽창이 일으나고 적혈구는 정상적인 용혈 부피 보다 높게 팽윤되며 엑스트라세포의 오스몰 농도가 약
70mOsm으로 될 때까지 용혈이 시작되지 않는다. (Meryman, H.T., Influence of certain neutral solutes
on red cell membrane area and permeability during hypotonic stress, Am. Journ. of Physiol.,
225:365-371, 1973).
수혈이 가능한 적혈구에 대한 절대적인 필요 때문에 ATP와 2, 3-DPG의 높은 세포 내에서의 수준을 유지하
면서도 세척 후 우수한 변형성과 낮은 저삼투압의 용액 및 이의 제조방법 뿐만 아니라, 정기적인 수집과
일반 처리방법으로 이루어지는 것 보다 향상된 저장 특성으로 미세척된 적혈구의 재현탁 방법에 대한 개
발은 매우 중요한 것이다.
[본 발명의 요약]
본 발명은 저장용액을 적혈구에 첨가하는 동안 셀의 위험한 용혈현상의 증가없이 저장중에 저삼투압의 적
절한 정도로 인도하는 적혈구의 저장방법을 제공하고자 하는 것이다.
본 발명은 냉동 상태하에서 적혈구의 저장 보존기간을 연장하는 방법에 관한 것인 바, 이는 다음과 같이
구성하고 있다. 즉, 잔류 플라스마가 보지하는 동안 적혈구로부터 플라스마의 분리, 그리고 생물학적으로
적합한 용액을 상기 적혈구에 첨가하는 것으로 여기서 생물학적으로 적합한 용액이라는 것은 70 mOsm 보
다 낮은 효과량의 오스몰농도를 말한다.
본 발명은 또한 냉동 상태하에서 적혈구의 저장 보존기간의 연장 방법을 제공하고자 하는 것으로, 여기서
적혈구에 첨가되는 생물학적으로 적합한 용액은 비침투성 음이온이 아니며 비침투성 비전해액과 물 보다
적혈구에 서서히 침투되는 최소한 하나의 용질로 구성하고 있다.
[본 발명 도의 간단한 설명]
도 1은 본 발명의 실시예와 비교예에 대해 8주간 저장하는 동안 적혈구의 형태학적 지수를 나타낸
것이다.
[본 발명의 상세한 설명]
별도로 정의하지 않는 한, 여기에 기술된 모든 기술 및 과학 용어는 이 분야에 통상의 지식을 가진 자가
이해할 수 있는 용어로 표기하였다. 여기에 표기한 모든 자료는 문헌으로 구체화하였다.
여기서 사용되는 연장되는 저장 보존기간(prolonging storage shelf-life) 이라는 것은 이 분야에서 잘
알려진 공지방법에 의해 저장된 셀에서 변형학적 지수, ATP 및 2, 3-DPG 보다 높은 셀 변형학적 지수와
ATP 및 2, 3-DPG 수준으로 그리고 낮은 용혈현상으로 확장된 시간 동안 생육할 수 있는 적혈구의 보존을
말한다.
여기서 사용되는 생물학적으로 적합한 용액이라는 것은 생육력을 보지하는 셀과 접촉한 셀에서 수혈가능
한 용액을 말한다. 접촉은 어떠한 방법으로 용액에 노출되는 셀의 어떠한 프로세스도 포함하는데 제한할
필요가 없으나 용액에서 셀의 현탁물을 포함한다. 생물학적으로 적합한 용액은 pH와, 셀 막의 원상태로
유지하는 데에 적합하며 또한 그것과 함께 접촉하는 셀의 생물학적 및 물리학적인 반응을 파괴하거나 또
는 억제하지 않는 염 농도를 가진다. 전형적인 생물학적으로 적합한 용액의 pH는 6-9.5사이이며 등삼투압
이거나 또는 단지 알맞게 저삼투압적이거나 또는 과삼투압적이다.
여기서 사용되는 침투되는 용질(penetrating solute)이라는 것은 적혈구의 셀 막을 자유롭게 움직이는 용
질을 말한다. 이러한 용질은 글루코스와 같은 작은 비전해액이거나 또는 시트래이트, 글리콜래이트 및 글
리세로포스페이트와 같은 큰 음이온이다. 양이온은 이의 저하 때문에 셀 막에 침투할 수 없을 것이다. 예
외적으로 암모늄 이온은 중성 분자로 셀에 들어가며 셀 안으로 이온화된 상태로 재조성된다.
여기서 사용되는 서서히 침투되는 용질이라는 것은 적혈구의 셀 막에 자유롭게 움직일 수 있는 침투되는
용질을 말하지만 물 보다는 낮은 속도를 가진다. 서서히 침투되는 용질에 의해 공급되는 삼투압적인 공급
이 셀내에서 확산에 의해 잃기전에 첨가용액이 플라스마와 적절히 혼합될 수 있는 정도로 서서히 침투되
는 용질이 서서히 침투되어야 한다. 따라서, 만약 엑스트라세포 용액이 공격적으로 혼합된다면, 서서히
침투되는 용질의 확산속도가 증가할 것이다. 일반적으로, 서서히 침투되는 용질은 1초 이하에서 셀 막을
가로질러 평형에 도달하지 못한다. 바람직하기로는 서서히 침투되는 용질은 10초 이하에서 평형에 도달하
지 못하며, 더욱 바람직하기로는 30초 이하이며, 가장 바람직한 것은 1분 이하이다. 그러한 용질은 제한
할 필요가 없으나 글루코스, 글리콜 및 디-크실로스와 같은 용질을 포함한다.
여기서 사용되는 잔류 플라스마라는 것은 플라스마가 이 분야에서 알려진 공지방법에 의해 원심분리와 플
라스마 압을 통하여 적혈구로부터 분리된 후 적혈구 현탁물에 남아 있는 플라스마의 양을 말한다. 일반적
으로, 260ml의 적혈구 현탁물에 약 50ml의 잔류 플라스마가 남는다.
여기서 사용되는 유효한 오스몰농도라는 것은 적혈구 막에 침투하지 못하고 따라서 적혈구의 체적 결정을
하는 용질의 결합된 오스몰농도를 말한다.
여기서 사용되는 냉동된 상태라 함은 냉동하에 적혈구의 저장을 위한 상태를 말한다. 냉동된 상태는 제한
할 필요가 없으나 4±2℃의 온도를 포함한다.
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첨가용액의 저삼투압은 물 보다 늦게 적혈구에 침투되는 침투 용질을 구성하고 있는 첨가용액을 이용하여
증가할 수 있음을 발견하게 되었다. 특히, 70 mOsm 보다 낮은 유효한 오스몰농도를 가진 생물학적으로 적
합한 용액을 사용할 수 있다. 이러한 특성을 가진 수용성 용액은 예컨대, 용액의 오스몰농도가 70 mOsm
보다 낮은 용액에서 침투되지 않은 용질의 양을 조정하여 만들 수 있다. 그 다음, 이 용액은 서서히 침투
되는 용질을 사용하여 용액의 오스몰농도의 증가에 의해 적혈구 현탁물로 등삼투압적인 수준이나 또는 거
의 등삼투압적인 수준으로 끌어 올릴 수 있다. 이 유효한 용액은 이 용액을 셀 현탁물에 첨가할 때에 실
제적인 용혈현상을 피하기 위해 필요한 삼투압적인 공급을 제공한다.
서서히 침투되는 용질은 서서히 적혈구에 들어가지만, 셀의 막을 건너 마침내 평형농도에 접근할 것이다.
이것은 예컨대, 적혈구가 용혈작용 없이 물에 글루코스의 등삼투압 용액과 혼합할 수 있음을 의미한다.
엑스트라세포 글루코스의 등삼투압적인 공급은 세포내의 헤로글로빈과 염들의 것과 동일하게 될 것이다.
따라서, 적혈구의 부피에는 어떠한 변화가 없을 것이다.
그러나, 글루코스가 공격적으로 셀에 들어가면 글로코스에 의해 삼투압적인 공급이 공격성을 잃게 되고
셀들은 팽윤될 것이다. 삼투압적인 효과와 관련, 최종적인 결과는 순수 물이 셀 현탁물에 첨가되어 셀이
엑스트라세포 용액에 손상되는 오스말농도와 일치하여 팽윤되는 것 처럼 될 것이다. 만약 비침투 용질이
엑스트라 세포 용액에 없으면, 물은 그들이 용혈시킬 때 까지 계속하여 이 셀에 들어갈 것이다. 그러나,
본 발명에서는 첨가용액이 비침투 용질을 포함하지 않아도 잔류 플라스마는 한 번 평형이 일으난 용혈현
상을 피하기 위해 적절히 엑스트라세포의 삼투압적인 공급을 제공한다.
용액의 첨가가 완료되면, 적혈구는 삼투압적인 공급과 같이 그렇게 많이 요구하지 않는다. 물이 적혈구에
들어가 그 안에서 비침투 용질을 묽게 한다. 이것은 적혈구의 세포내에서 오스몰농도를 감소시키는데 그
때문에 요구되는 엑스트라세포의 오스몰농도가 감소된다. 이와 동시에 적혈구에서 물의 삼투압적인 활동
이 묽게된 엑스트라세포 플라스마의 어떠한 농도로 나타날 것이다. 따라서, 물이 셀에 들어가면, 플라스
마의 비침투 용질들이, 특히 나트륨, 증가된 삼투압적인 공급을 제공한다. 잔류 플라스마에 희석되는 저
장용액의 양은 용혈부피를 측정할 수 있을 것이며 그렇게 함으로써 실제적으로 용혈작용에 원인으로 되지
않을 최종 저장용액의 최소한의 유효한 오스몰농도는 300과 700mOsm 사이로 저하될 것이며 일반적인 실험
에 의해 측정할 수 있을 것이다.
첨가용액은 물 보다 더욱 서서히 셀에 침투되는 최소한의 한 용질로 구성되기 때문에 이 평형은 적혈구에
삼투압적으로 공급하지 못하는 용액이 적혈구와 접촉하기 전에 일으날 수 있다. 결론적으로, 삼투압적인
평형은 셀에 자유롭게 확산하지 못하는, 주로 헤모글로빈과 칼륨, 이러한 세포내의 용질과 셀에 침투하지
못하는, 주로 플라스마에서의 나트륨, 이러한 엑스트라셀의 용질 사이에 일으나는 것이다. 최종적인 결과
로는 셀 부피에 증가를 가져다 줄 것이다. 이 팽윤된 셀은 저장되는 동안 저삼투압이라는 장점을 제공한
다.
잔류 플라스마는 적절하게 엑스트라세포에 삼투압적으로 공급하기 때문에, 첨가용액의 유효한 오스몰농도
는 70 mOsm 이하가 될 것이다. 생물학적으로 적합한 용액의 바람직한 유효한 오스몰농도는 60 mOsm 이하
이며, 더욱 바람직한 이 용액의 유효한 오스몰농도는 50 mOsm 이하이며, 더 더욱 바람직한 유효한 오스몰
농도는 25 mOsm 이하이며, 이 보다 더 바람직한 유효한 오스몰농도는 15 mOsm 이하이며, 가장 바람직한
유효한 오스몰농도는 5 mOsm 이다. 사실, 본 발명의 가장 바람직한 실시예에 있어서, 생물학적으로 적합
한 용액의 유효한 오스몰농도는 0이다. 이 실시예에 있어서, 온전한 엑스트라세포의 공급은 서서히 침투
되는 용질에 의해 셀의 침투 후 잔류 플라스마의 비침투 용질에 의해 공급되어 진다.
생물학적으로 적합한 용액은 바람직하게 완충용액이다. 부가해서 이 용액의 pH는 적혈구 현탁물의 pH 보
다 높은 것이 바람직하다. 더욱이, 첨가용액은 적혈구에 등삼투압적이거나 또는 저삼투압적으로 선택적이
긴 하나, 적혈구에 저삼투압적인 것이 바람직하다. 서서히 침투되는 용질이 적혈구에 침투되면, 첨가용액
그 자체가 적혈구에 대해 저삼투압적이다.
생물학적으로 적합한용액은 또한 아데닌을 포함하는데 바람직하게는 소량으로서 예컨대 2mmol 이다. 더욱
이, 이 첨가용액은 포스페이트를 포함하는데 예컨대 나트륨 포스페이트의 형태이며 이것 또한 소량이 바
람직하다. 부가적으로 말하자면, 이 용액은 실제적으로 비침투성 음이온과 비침투성의 비전해액을 포함하
지 않은 것이 바람직하다.
글루코스는 몇가지 이유로 인해 용질에 서서히 침투하는 것이 바람직하다. 첫째, 글루코스는 적혈구의 해
당 공급이 필요하다. 둘째, 이것은 수혈을 위한 일반적인 제제(familiar agent)이다. 마지막으로, 이것은
다분자 안정화제이다.
본 발명의 주 목표는 적혈구를 저장하는 동안 셀 모르폴로지를 증가시키고 용혈현상을 감소시키는 체적증
가를 위한 모든 장점을 얻기 위해 저장 중에 적혈구의 체적을 최대로 하는 것이다. 본 발명의 바람직한
실시예의 조성물, 일컬어 글루코스, 포스페이트 및 아데닌으로 구성된 용액이 모드 다분자 안정화제이므
로, 이 용액은 적혈구가 막 팽창을 통해 용혈성인 체적에 도달하는 오스몰농도를 감소시킬 수 있다.
예컨대, 100ml의 등삼투압성 글루코스는 약 200ml의 적혈구와 50ml의 잔류 플라스마를 함유하는 셀의 현
탁물과 결합할 수 있다. 이 글루코스는 혼합과정에서 용혈작용을 제어하기 위해 일시적으로 삼투압적인
공급을 제공하지만, 셀 막을 통해 평형을 이루어 유효한 오스몰농도가 0이다. 이 글루코스가 셀 막을 통
해 평형을 이루므로 셀에 대해 삼투압성 공급을 더 이상 제공할 수 없어 이것은 마치 100ml의 물이 셀 현
탁물에 가하는 것 처럼 된다. 엑스트라세포 용액의 오스몰농도의 감소로 인해 적혈구가 팽윤된다. 총체적
인 결과는 약 30%의 셀 체적이 증가될 것이다. 이 예에서, 플라스마와 글루코스의 평형을 혼합한 후 셀
현탁물의 유효한 오스몰농도가 약 200 mOsm으로 될 것이다. 이것은 실제적으로 막 팽창이 없다하여도 용
혈작용을 방지하는데에 필요로 한다.
만약 다량의 첨가용액을 사용한다면, 더욱더 셀 팽윤이 성취될 것이다. 이 다량의 희석물은 최종 오스몰
농도를 효과적으로 감소시키고 안정화제 용질의 비율을 증가시키게 되므로 막 팽창을 향시키고 용혈없이
170 mOsm 이하로 떨어지게하여 최종 용액의 오스몰농도를 효과적으로 허용케 한다.
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이 분야에 숙련된 자 라면, 상기의 논의된 방법이 저장용액과 특이한 특성을 성취하기 위해 조정할 수 있
음을 알게 될 것이다. 본 발명은 여기에 인용된 한 실시예에 대해 실증하고자 참고로 기술하고자 하며,
이 실시예는 본 발명이 여기에 사용되는 재료, 조건, 프로세스 파라메터 등으로 제한하고자 한다는 것은
아니다.
[실시예 1]
적혈구 현탁물은 시트래이트, 포스페이트 및 글루코스를 포함하고 있는 용액에서 혈액을 채취하여
얻었다. 이 혈액을 약 1500×G에서 원심분리하고 플라스마를 제거한다. 표 2에 정의한 바와 같이, 100ml
의 첨가용액 A를 적혈구 현탁물에 가하고 이 최종 용액을 8주간 4℃의 온도에서 저장하였다. 적혈구의 모
르폴로지 지수를 냉동상태에서 저장하는 동안 그림 1에 나타내었다.
[비교예 1]
상기와 같은 방법으로 적혈구 현탁물을 얻었다. 표 2에 정의한 바와 같이, 100ml 첨가용액 B를 적혈구 현
탁물에 가하고 얻어진 이 용액을 8주간 4℃의 온도에서 저장하였다. 적혈구의 모르폴로지 지수는 냉동상
태에서 저장하는 동안 그림 1에 나타내었다.
[표 2]
실시예 1에 의해 저장된 적혈구의 모르폴로지 지수는 적혈구의 용혈작용의 양에서 통계학적으로 어떤 현
저한 변화없이 장기간 동안 허용될 수 있는 수준에서 유지된다. 특히, 실시예 1에 의해 저장된 적혈구들
에서 이 적혈구 모르폴로지 지수는 비교예 1에 의해 저장된 적혈구들에서의 이 적혈구 모르폴로지 보다
평균 5%의 증가를 나타낸다. 더욱이, 비교예 1에 의해 저장된 적혈구에 대해 모르폴로지 지수가 6주 동안
약 75%의 감소를 보이는 반면, 실시예 1에서는 8주간 냉동된 상태에서 저장하여도 75%까지 감소하지 않는
다. 따라서, 본 발명에 의한 첨가용액을 사용하여 적혈구를 장기간 저장할 수 있다.
(57) 청구의 범위
청구항 1
냉동상태에서 적혈구의 저장 보존기간을 연장시키는 방법에 있어서, 적혈구 현탄물중 적혈구로부터 플라
스마를 분리시켜 잔류 플라스마를 보지하고, 상기 적혈구에 70 mOsm 이하의 유효 오스몰농도를 가진 생물
학적으로 적합한 용액을 첨가시키는 것을 특징으로 하는 냉동상태에서 적혈구의 저장 보존기간을 연장시
키는 방법.
청구항 2
제1항에 있어서, 상기 생물학적으로 적합한 용액이 적혈구 막을 물 보다 더 느리게 침투하는 한가지 이상
의 침투되는 용질로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 3
제2항에 있어서, 상기 침투되는 용질이 글루코스, 글리세롤과 α-크실로스 중에서 선택되는 것을 특징으
로 하는 냉동상태에서 적혈구의 저장 보존기간을 연장시키는 방법.
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청구항 4
제2항에 있어서, 상기 침투되는 용질이 글루코스인 것을 특징으로 하는 냉동상태에서 적혈구의 저장 보존
기간을 연장시키는 방법.
청구항 5
제1항에 있어서, 상기 생물학적으로 적합한 용액이 60 mOsm 이하의 유효 오스몰농도를 갖는 것을 특징으
로 하는 냉동상태에서 적혈구의 저장 보존기간을 연장시키는 방법.
청구항 6
제1항에 있어서, 상기 생물학적으로 적합한 용액이 50 mOsm 이하의 유효 오스몰농도를 갖는 것을 특징으
로 하는 냉동상태에서 적혈구의 저장 보존기간을 연장시키는 방법.
청구항 7
제1항에 있어서, 상기 생물학적으로 적합한 용액이 25 mOsm 이하의 유효 오스몰농도를 갖는 것을 특징으
로 하는 냉동상태에서 적혈구의 저장 보존기간을 연장시키는 방법.
청구항 8
제1항에 있어서, 상기 생물학적으로 적합한 용액이 15mOsm 이하의 유효 오스몰농도를 갖는 것을 특징으로
하는 냉동상태에서 적혈구의 저장 보존기간을 연장시키는 방법.
청구항 9
제1항에 있어서, 상기 생물학적으로 적합한 용액이 5 mOsm 이하의 유효 오스몰농도를 갖는 것을 특징으로
하는 냉동상태에서 적혈구의 저장 보존기간을 연장시키는 방법.
청구항 10
제1항에 있어서, 상기 생물학적으로 적합한 용액의 유효 오스몰농도가 0인 것을 특징으로 하는 냉동상태
에서 적혈구의 저장 보존기간을 연장시키는 방법.
청구항 11
제1항에 있어서, 상기 생물학적으로 적합한 용액이 아데닌과 포스페이트 중에서 선택된 최소한 한가지 이
상으로 구성되는 것이 특징인 냉동상태에서 적혈구의 저장 보존기간을 연장시키는 방법.
청구항 12
제11항에 있어서, 상기 생물학적으로 적합한 용액이 글루코스, 아데닌과 포스페이트로 구성되는 것을 특
징으로 하는 냉동상태에서 적혈구의 저장 보존기간을 연장시키는 방법.
청구항 13
제1항에 있어서, 플라스마를 원심분리에 의해 적혈구로 부터 분리시키는 것을 특징으로 하는 냉동상태에
서 적혈구의 저장 보존기간을 연장시키는 방법.
청구항 14
제1항에 있어서, 상기 생물학적으로 적합한 용액이 적혈구에 저삼투압성인 것이 특징인 냉동상태에서 적
혈구의 저장 보존기간을 연장시키는 방법.
청구항 15
제1항에 있어서, 생물학적으로 적합한 용액의 pH가 적혈구 현탁물의 pH 보다 높은 것을 특징으로 하는 냉
동상태에서 적혈구의 저장 보존기간을 연장시키는 방법.
청구항 16
냉동상태에서 적혈구의 저장 보존기간을 연장시키는 방법에 있어서, 적혈구 현탁물중 적혈구로 부터 플라
스마를 분리시켜 잔류 플라스마를 보유하고, 물 보다 더 느리게 침투하고 비침투성 음이온 또는 비침투성
비전해질이 실질적으로 존재하지 않는 한가지 이상의 침투되는 용질로 구성되는 생물학적으로 적합한 용
액을 상기 적혈구에 첨가시키는 것을 특징으로 하는 냉동상태에서 적혈구의 저장 보존기간을 연장시키는
방법.
청구항 17
제16항에 있어서, 상기 생물학적으로 적합한 용액이 적혈구에 저삼투압성인 것이 특징인 냉동상태에서 적
혈구의 저장 보존기간을 연장시키는 방법.
청구항 18
제16항에 있어서, 상기 생물학적으로 적합한 용액의 pH가 적혈구 현탁물의 pH보다 높은 것을 특징으로 하
는 냉동상태에서 적혈구의 저장 보존기간을 연장시키는 방법.
청구항 19
제16항에 있어서, 상기 생물학적으로 적합한 용액이 비침투성 용질을 함유하지 않는 것을 특징으로 하는
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냉동상태에서 적혈구의 저장 보존기간을 연장시키는 방법.
청구항 20
제16항에 있어서, 상기 느리게 침투되는 용질이 글루코스인 것을 특징으로 하는 냉동상태에서 적혈구의
저장 보존기간을 연장시키는 방법.
도면
도면1
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